1864年12月7日（一说1863年），王采玉出生于浙江省嵊县葛竹村，原名王彩玉。
 
她父亲王有则是清朝国学生，多次应考，都未获得功名，后来逐渐家道中落了。他原配妻子病故后，续弦娶了姚氏，姚氏生了2儿1女，这个女儿便是王采玉。
 
王采玉18岁时，父母把他许配给了竺某（一说俞某）。
 
竺某是跸驻乡曹家田人，父母早亡，在葛竹村做长工，东家是王有则的本家。1882年，东家做媒，王采玉嫁给了竺某。
 
第二年春天，王采玉生下了儿子，但没过几个月，孩子便夭折了，王采玉和竺某都很伤心。秋天时，曹家田一带发生瘟疫（霍乱），竺某不幸染病去世。
 
一年之内，王采玉又是丧子，又是丧夫，村里人都说她克夫克子。王采玉很难过，又加上夫家没什么产业，她就回娘家了。
 
回到娘家后第二年，父亲也生病去世了，王采玉便觉得自己真是不祥之人。
 
没过多久，附近金竹庵的一个老尼姑病死了。王采玉的母亲经常去这金竹庵烧香的，认识这个老尼姑，就让王采玉去帮忙料理后事。
 
王采玉去料理完老尼姑的后事，决定出家了，但母亲不同意。后来，王采玉就在庵里带发修行了。
 
王采玉的堂兄王贤东，在溪口玉泰盐铺当伙计。玉泰盐铺的老板蒋肇聪，在原配去世后，续弦娶了孙氏，可后来孙氏也去世了。他一个人又要做生意，又要管家事，忙不过来，就想再续个弦，可找不到合适的人。
 
王贤东为了拍东家的马屁，就给蒋肇聪和王采玉做媒了。
 
1886年6月，在王贤东的撮合下，22岁的王采玉嫁给了45岁的蒋肇聪。婚后，王采玉生下了2儿2女，可惜1儿1女夭折了，成年的只有老大蒋瑞元和老三蒋瑞莲。
 
蒋瑞元便是蒋介石，“蒋介石”这个名字，是他去日本留学后自己改的。
 
1895年，蒋肇聪因病去世，王采玉第二次守寡，此时蒋介石才8岁，蒋瑞莲才5岁。
 
蒋肇聪和前两任妻子生的孩子，已经成年，他们坚持和王采玉分家了。王采玉就独自做着盐铺的生意，抚养一双儿女。
 
1901年，王采玉让14岁的蒋介石迎娶了19岁的毛福梅，帮儿子成了家；1907年，王采玉把17岁的女儿蒋瑞莲，嫁给了曾是玉泰盐铺学徒的竺芝珊。
 
1921年6月14日，王采玉因心脏病复发而去世，终年57岁。去世后，她没和蒋肇聪合葬，而是另葬别处了。
 
王采玉临终时，嘱咐蒋介石不能和毛福梅离婚，蒋介石答应了。但后来，蒋介石为了娶宋美龄，还是和毛福梅离婚了。